1)制備細胞懸液,計數。
2)在96孔板中接種細胞懸液,每孔約100μl,同樣的樣本可做3個(gè)重復。
3)將培養板放入培養箱中預培養一段時(shí)間(37℃, 5%CO2),細胞貼壁需要大約2-4h,如果是懸浮細胞,該步驟可以省去。
4)每孔各加入10μl CCK-8溶液,由于加入的CCK-8量比較少,可能會(huì )因試劑沾在孔壁上而帶來(lái)誤差,建議在加完試劑后輕輕晃動(dòng)培養板以幫助混勻,或者直接配置含10%CCK-8的培養基,以換液的形式加入。另外注意,加樣的過(guò)程中盡量不要產(chǎn)生氣泡。
5)將培養板放入培養箱中孵育1-4h。因為細胞種類(lèi)不同,形成的formazan的量也不一樣,所以如果顯色不夠的話(huà),可以延長(cháng)培養時(shí)間,特別是血液細胞形成的formazan很少,需要較長(cháng)的顯色時(shí)間(5-6h)。
6)酶標儀測定450nm處的吸光值(OD)。
7)若暫時(shí)不測定OD值,可以在各孔中加入10μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,室溫下避光保存,這樣可以保證OD值在24h內不發(fā)生變化。
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