1. MTT法:是一種檢測細胞存活和生長(cháng)的方法。該方法已廣泛用于生物活性因子的活性檢測、抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟、快捷。
原理:活細胞線(xiàn)粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無(wú)此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚,用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長(cháng)處測定其吸光度值,可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。
2. CCK-8法:可用于簡(jiǎn)便而準確的細胞增殖和毒性分析,常用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗。
原理:該試劑中含有WST-8【化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】,它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物(Formazan dye)。生成的甲瓚物的數量與活細胞的數量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細胞增殖和毒性分析。
3. Brdu: 即5-Bromo-2'-Deoxyuridine,中文全名5-溴脫氧尿嘧啶核苷,為胸腺嘧啶的衍生物,可代替胸腺嘧啶在DNA合成期,S期活體注射或細胞培養加入。而后利用抗Brdu單克隆抗體ICC染色顯示增殖細胞。同時(shí)結合其它細胞標記物雙重染色可判斷增殖細胞的種類(lèi),增殖速度,對研究細胞動(dòng)力學(xué)有重要意義。
但由于抗體分子量大,難于摻入并被有效檢測。因此BrdU檢測需采用DNA酶或HCl或加熱使DNA變性。這些處理方法會(huì )破壞抗原識別位點(diǎn),此外許多細胞周期分析的染料都需要dsDNA。這種處理方法也使得同一樣本無(wú)法同時(shí)進(jìn)行細胞周期分析。對于植物細胞等有細胞壁的分析。采用抗體檢測還需要消化細胞壁,細胞壁消化酶常含有一些雜質(zhì),會(huì )導致檢測的可靠性降低,同時(shí)BrdU檢測則需要進(jìn)行長(cháng)時(shí)間的孵育--幾個(gè)小時(shí)甚至過(guò)夜。
4. EDU: 即5-Ethynyl-2’- deoxyuridine, 是一種胸腺嘧啶核苷類(lèi)似物,能夠在細胞增殖時(shí)期代替胸腺嘧啶(T)滲入正在復制的DNA分子中。通過(guò)基于EdU與Apollo熒光染料的特異性反應快速檢測細胞DNA復制活性,適用于細胞增殖、細胞分化、生長(cháng)與發(fā)育、DNA修復、病毒復制、細胞標記示蹤等方面的研究,尤其適合進(jìn)行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他藥物的篩選實(shí)驗。
*以上內容來(lái)自網(wǎng)絡(luò )